Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой

Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой

You are using an outdated browser. Please upgrade your browser or activate Google Chrome Frame to improve your experience.

mun.Chişinău, str. Alba Iulia, 21 карта

(+373) 22 944 944 (+373) 69 944 944
Blvd. Traian 7/1, Chisinau

Для оценки тромбоцитарного компонента гемостаза подсчитывают число тромбоцитов в крови. Патология тромбоцитов является причиной кровоточивости почти в 80 % случаев. При этом тромбоцитопения – наиболее частое ее проявление. Констатировать тромбоцитопению следует в тех случаях, когда количество тромбоцитов составляет менее 150 × 10 9 /л.
Длительность кровотечения – важный скрининговый тест, основное достоинство которого состоит в том, что он позволяет одновременно качественно оценить количество тромбоцитов в крови, их адгезивные и агрегационные функции, функциональные свойства стенки кровеносных сосудов, а также выраженный дефицит плазменных факторов свертывания (например, факторов VIII и IX, недостаток которых является причиной гемофилии А и В).
Удлинение времени кровотечения отражает нарушение гемостаза вследствие тромбоцитопений, тромбоцитопатий (нарушения функций тромбоцитов – адгезии и агрегации), нарушений сосудистой стенки или сочетания этих факторов. Удлинение времени кровотечения при нормальном количестве тромбоцитов в крови позволяет предположить нарушение их функций. В этом и состоит основная ценность теста, т.к. для оценки адгезивных и агрегационных свойств тромбоцитов в лабораторных условиях необходимо сложное и дорогое оборудование (агрегометр).
Когда функции тромбоцитов не нарушены, время кровотечения остается в норме даже при снижении числа тромбоцитов до 100,0 x 10 9 /л. При количестве тромбоцитов ниже этого уровня время кровотечения постепенно увеличивается в линейном соотношении с числом тромбоцитов. Спонтанные кровотечения возникают, если количество тромбоцитов становится ниже 50,0 x 10 9 /л, смертельное кровотечение почти неизбежно, если количество тромбоцитов снижается до 5,0 x 10 9 /л. Длительность кровотечения увеличивается при следующих состояниях:

• Выраженных тромбоцитопениях;
• Нарушении функции тромбоцитов – тромбоцитопатиях, которые бывают врожденными (синдром Бернара-Сулье) и приобретенными (пернициозная анемия, острый и хронический лейкоз, миеломная болезнь, длительный прием аспирина);
• Выраженном снижении плазменных факторов свертывания;
• При нарушении резистентности стенки капилляров (недостаток витамина С, дефектах сокращения капилляров – микроангиопатиях).

Укорочение времени кровотечения диагностического значения не имеет и чаще всего бывает следствием технической ошибки при проведении теста или свидетельствует о повышенной спастической способности капилляров. Оценить склонность к тромбообразованию по данным теста длительности кровотечения невозможно. Повышенное количество тромбоцитов в крови – тромбоцитоз, несет с собой риск повышения свертываемости и проявляется тромбозами. В клинических ситуациях риск тромбоза становится реальным, если количество тромбоцитов достигает значений 1000,0 x 10 9 /л.

Исследование агрегационных функций тромбоцитов
Процессы агрегации изучают с помощью агрегометра, отражающего ход агрегации графически в виде кривой; в качестве стимулятора агрегации часто используют АДФ, адреналин и коллаген.

Нарушения агрегации тромбоцитов при различных заболеваниях (по результатам исследований на агрегометре)

Вид тромбоцитопатий

Стимулятор агрегации и нарушения агрегации

АДФ

коллаген

адреналин

ристоцетин

первичная волна

вторичная волна

Примечание: (+,-) – диагностического значения не имеет.

Патология тромбоцитов является причиной кровоточивости почти в 80 % случаев. При этом тромбоцитопения – наиболее частое ее проявление. Констатировать тромбоцитопению следует в тех случаях, когда количество тромбоцитов составляет менее 150 × 10 9 /л.
Различают острую и хроническую тромбоцитопению. Последняя диагностируется тогда, когда продолжительность ее превышает 6 мес. У лиц с уровнем тромбоцитов выше 50×10 9 /л редко наблюдается кровоточивость. Тем ни менее, снижение тромбоцитов ниже 100×10 9 /л может сопровождать серьезную патологию. В связи с этим причину каждого случая тромбоцитопении необходимо выяснять.
При тромбоцитопениях, тяжелых тромбоцитопатиях и при дефиците фактора Виллебранда (ФВ) значительно удлиняется время кровотечения. Кровоточивость связана с недостаточностью адгезивно-агрегационной функции тромбоцитов – нарушением образования в поврежденных сосудах тромбоцитарной пробки. Это может быть обусловлено либо значительным снижением количества тромбоцитов в крови, либо их дисфункцией, в основе которой чаще всего лежит отсутствие или блокада на мембране тромбоцитов рецепторов, взаимодействующих со стимуляторами (агонистами) агрегации этих клеток (ФВ, адреналином, АДФ, фибриногеном, арахидоновой кислотой и простагландинами), либо отсутствием в тромбоцитах или нарушением выхода из них компонентов гранул, содержащих эти стимуляторы агрегации.
Современные гематологические анализаторы выводят тромбоцитометрические кривые (гистограммы распределения тромбоцитов по объему).
Отмечается связь размера тромбоцитов с их функциональной активностью, содержанием в гранулах тромбоцитов биологически активных веществ, склонностью клеток к адгезии, изменениями объема тромбоцитов перед агрегацией. Наличие в крови преимущественно молодых форм тромбоцитов приводит к сдвигу гистограммы вправо, старые клетки располагаются в гистограмме слева, так как, по мере старения тромбоцитов их объем уменьшается. Увеличение содержания юных форм тромбоцитов наблюдается при кровопотере и свидетельствует об усиленной регенерации. Увеличение содержания старых форм, вакуолизированных тромбоцитов, форм раздражения и уменьшение содержания зрелых тромбоцитов, характерны для различных воспалительных процессов, интоксикаций, злокачественных новообразований.

Тромбомодулин – интегральный мембранный белок, рецептор тромбина, находящийся на клетках эндотелия кровеносных сосудов и участвующий в системе антикоагуляции. Он определяет скорость и направление процесса гемостаза, активно ограничивает и регулирует свёртывание крови. Эндотелий, образуя тромбомодулин, блокирует активные коагулянты, выделяющиеся печенью и находящиеся в плазме крови, в первую очередь — самый активный фактор свертывания — тромбин. Связанный тромбин исключается из системы свёртывания крови.
Тромбин, присоединившись к тромбомодулину, приобретает новые качества: образует вместе с противосвертывающими протеинами С и S (кофактор протеина S) антиагрегантный и антитромботический комплекс, который препятствует свертыванию и тормозит фибринолиз. Таким образом система тромбомодулин-протеин С выполняет антикоагулянтную функцию. Более того, модифицированный при взаимодействии с тромбомодулином, тромбин, теряет способность превращать фибриноген в фибрин и вызывать агрегацию тромбоцитов. При повреждении сосудистой стенки тромбомодулин «отделяется» от эндотелия и поступает в кровь. Увеличение его в крови наблюдается у больных с претромботическими состояниями, васкулитами и т.д. Степень увеличения тромбомодулина в крови имеет диагностическое и прогностическое значение.
Тромбомодулин значительно снижен при некоторых заболеваниях, таких как атеросклероз, что может увеличивать свёртываемость крови и повышать риск тромбоза.

Фактор В иллебранда – сложный мультимерный адгезивный гликопротеин, носитель-стабилизатор прокоагулянтного протеина F VIII:C, который является белком адгезии в процессах гемостаза.
Фактор Виллебранда может связывать коллаген и, возможно, другие эндотелиальные структуры и опосредует адгезию тромбоцитов к субэндотелию через связывание поверхностного рецептора тромбоцитов гликопротеина Ib. Адгезия тромбоцитов, опосредованная Фактором Виллебранда, происходит наиболее интенсивно при высоких скоростях сдвига, т.е. в артериях. VIII-vWF является также носителем F VIII – антигемофильного глобулина А. Фактор Виллебранда у здоровых людей предотвращает рост тромба в сосудах, активируя образования плазмина. Повышенные уровни активности Фактора Виллебранда являются индикатором повреждения эндотелия при сосудистых заболеваниях, что может быть существенно для гипертензионных сосудистых осложнений.
Болезнь фон Виллебранда – врождённый геморрагический диатез. В легкой форме эта болезнь является самым частым геморрагическим нарушением у мужчин, с частотой 1:100. Это заболевание гетерогенной природы, вызываемое либо дефектами структуры белка, либо снижением концентрации Фактора Виллебранда. Классификация заболевания основана на клинической картине, анамнезе и результатах лабораторного анализа, включая время свёртывания и определение антигена и активности Фактора Виллебранда. Определение уровня Фактора Виллебранда помогает в дифференциальном диагнозе двух основных типов заболевания: типа 1 и типа 2. Определение типа болезни принципиально, так как от этого зависит выбор тактики ведения больного.

Фибронектин является рецептором для фибринстабилизирующего фактора. Способствует адгезии тромбоцитов, участвуя в образовании белого тромба; связывает гепарин. Присоединяясь к фибрину, фибронектин уплотняет тромб.
Под действием фибронектина клетки гладких мышц, эпителиоцитов, фибробластов повышают свою чувствительность к факторам роста, что может вызвать утолщение мышечной стенки сосудов (сужение диаметра).

Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой

Библиографическая ссылка на статью:
// Современные научные исследования и инновации. 2013. № 1 [Электронный ресурс]. URL: https://web.snauka.ru/issues/2013/01/19651 (дата обращения: 29.01.2022).

Агрегация тромбоцитов является одной из главных функций первичного звена гемостаза и служит важнейшим показателем реологических свойств крови. Поэтому изменение функционального состояния тромбоцитов свидетельствует не только о состоянии свертывающей системы крови, но и косвенно указывает на функциональные возможности эндотелия. Кровяные пластинки играют значительную роль в инициации и развитии атеросклеротического повреждения, которое во многих случаях является важнейшим патогенетическим механизмом кардиальной патологии[3,5]. Используя антитромбоцитарные средства при различных проявлениях атеросклероза, существенно уменьшается риск развития инфаркта миокарда и ишемического инсульта. За последнее столетие ацетилсалициловая кислота (АСК) заняла центральное место в терапии заболеваний сердца и сосудов. В результате антиагрегационного эффекта АСК возникают стерические препятсвия присоединению арахидоновой кислоты к активному центру циклооксигеназы, которая участвует в синтезе тромбоксана А2, являющегося мощным проагрегантным и сосудосуживающим фактором. В настоящее время все более широко используют комбинацию АСК с ингибиторами АДФ-рецепторов,одним из которых является клопидогрель. Он необратимо связывается с АДФ-рецепторами, при этом тромбоциты не активируются, что препятствует их взаимодействию с фибриногеном.

Цель работы. Оценить дезагрегационную активность АСК и клопидогреля на фоне индукции тромбоцитов арахидоновой кислотой.

Материалы и методы. В исследовании использовалась кровь 20 добровольцев в возрасте 20-25 лет, не страдающих сердечно-сосудистой патологией. 10 человек принимали АСК в дозе 125мг в сутки и 10 человек принимали клопидогрель – 75 мг в сутки. Через 10 дней после начала приема забиралась кровь на исследование. Всем добровольцам проводилось исследование агрегационной способности кровяных пластинок в обогащенной тромбоцитами плазме. Агрегацию оценивали с помощью стандартного турбидометрического метода, с использованием двухканального лазерного анализатора агрегации тромбоцитов НПФ «Биола» (Москва). В качестве индуктора агрегации тромбоцитов использовали растворы в конечной концентрации: АДФ (10 и 5 мкг), коллагена (1 мг/мл) и адреналина (1,25 мкг/мл) и индуцированную арахидоновой кислотой (0,8мг/мл) фирмы «Технология-стандарт» (Баранул). Оценивали результаты по кривой степени агрегации в отн.ед. Результаты исследования обработаны с помощью пакета статистических программ Microsoft Excel. Статистический анализ данных включал оценку достоверности отличий сравниваемых величин по t-критерию Стьюдента (р) и расчетом коэффициента ранговой корреляции Спирмена (rs). Значимыми считался rs >0,3 при р

Результаты. При исследовании агрегационных свойств тромбоцитов мы изучали спонтанную агрегацию и индуцированную агрегацию. В качестве индукторов использовали АДФ, механизм действия которого заключается во взаимодействии с высокоаффинными аденозинчувсвительными рецепторными комплексами, расположенными на обеих поверхностях плазматической мембраны тромбоцита [1]. А также адреналин, который повышает проницаемость мембран для внеклеточного кальция при взаимодействии адреналина с адренорецепторами тромбоцита и коллагена, который реагирует с гликопротеиновыми комплексами Ia-IIa тромбоцитов [2,4]. При сравнении данных групп по оценке среднего размера агрегатов не выявлено отличий в агрегационной активности кровяных пластин при спонтанной, АДФ-, адреналин- и коллаген индуцированной агрегации. При добавлении же арахидоновой кислоты выявлены различия в агрегации тромбоцитов. В группе, принимающих клопидогрель этот показатель составил 9,7±1,7 отн.ед, а в группе добровольцев ,принимавших АСК – 2,0±0,3 отн.ед, (p<0,01). Выводы. Таким образом, результаты подтверждают, что АСК подавляет активность циклооксигеназы, что проявляется в низкой агрегационной активности кровянных пластинок по сравнению с группой, принимающих клопидогрель. Следовательно, данный тест с арахидоновой кислотой можно использовать для дезагрегационной активности АСК и диагностики резистентности к данному препарату.

Литература:

1. Киричук В.Ф. Физиология крови. Саратов: СарГ-МУ, 2002.с.66.

2. Мазуров А.В. Структура и функции мембранных гликопротеидов тромбоцитов / А.В. Мазуров, С.А. Васильев // Гематология и трансфизиология.- 1994.-Т.39.№1.-С.29.

3. Gawaz M. Platelets modulate atherosclerosis and progression of atherosclerotic plaques via interaction with progenitor and dendritic cells / Gawaz M., Stellos K., Langer H.F. // Thromb Hemost. 2008.- vol.6. – 2. – P.235-242.

4. Kirchhofer D. p2al integrins from dill cell types show different binding specificities / Kirchhofer D., Languino L.R., Ruoslahti E., Pierschbacher M.D.// J. Biol. Chemistry.-1990.-256. P.615.

5. Lindemann S. Platelets, inflammation and atherosclerosis.// Lindemann S., Kramer B., Seizer P., Gawaz M. / Thrombosis and Haemostasis.- 2007. – 5.-P.203-211.

Количество просмотров публикации: Please wait

© Если вы обнаружили нарушение авторских или смежных прав, пожалуйста, незамедлительно сообщите нам об этом по электронной почте или через форму обратной связи.

Исследование агрегационной способности тромбоцитов

Повышение агрегации – маркер гиперагреационного синдрома и тромбофилий. Наиболее часто используются турбидиметрический метод Борна, основанный на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы и метод исследования агрегации тромбоцитов, основанный на анализе флуктуаций светопропускания, вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале.

Материал для исследования. Цитратная богатая тромбоцитами плазма

Метод исследования определяется порядком работы на том или ином типе агрегометра.

В качестве индукторов наиболее часто используют растворы АДФ, ристоцетина, коллагена, адреналина, арахидоновой кислоты. Также могут использоваться растворы тромбина, серотонина и др.

Агрегация тромбоцитов с АДФ

Воздействие малых доз АДФ (обычно 1*10 -7 моль) приводит к формированию двойной волны агрегации. Первая фаза (первичная волна) зависит от добавленного экзогенного АДФ, а вторая фаза (вторичная волна агрегации) возникает за счет реакции высвобождения собственных агонистов, содержащихся в гранулах тромбоцитов. Большие дозы АДФ (обычно 1*10 -5 моль) приводят к слиянию первой и второй волн агрегации.

При анализе агрегатограмм обращают внимание на общий характер агрегации (одноволновая, двухволновая; полная, неполная; обратимая, необратимая) и скорость агрегации. Появление двухволновой агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях, вызывающих в норме обратимую агрегацию (обычно 1-5 мкмоль), указывает на повышение чувствительности тромбоцитов, а развитие одноволновой неполной (а часто и обратимой) агрегации при стимуляции АДФ в концентрациях 10 мкмоль и больше – на нарушение реакции высвобождения тромбоцитов.

Агрегация тромбоцитов с ристоцетином

Определение агрегации тромбоцитов с ристоцетином в плазме применяют для количественной оценки фактора Виллебранда. В основе метода лежит способность ристоцетина стимулировать in vitro взаимодействие фактора Виллебранда с тромбоцитарным гликопротеидом Ib. В большинстве случаев болезни Виллебранда отмечается нарушение ристоцетин-агрегации при нормальном ответе на воздействие АДФ, коллагена и адреналина. Нарушение ристоцетин-агрегации выявляют и при болезни Бернара-Сулье. Для дифференциации применяют тест с добавлением нормальной плазмы: при болезни Виллебранда после добавления нормальной плазмы ристоцетин-агрегация нормализуется, в то время как при синдроме Бернара-Сулье этого не происходит. Индуцированная ристоцетином агглютинация тромбоцитов снижена при большинстве случаев болезни Виллебранда, кроме типа IIВ.

Агрегация тромбоцитов с коллагеном

Агрегация тромбоцитов с коллагеном имеет достаточно выраженную латентную фазу, во время которой происходит активация фосфолипазы С. В зависимости от концентрации используемого реагента продолжительность этой фазы может составлять 5-7 минут. После завершения этого периода в тромбоцитах происходят процессы, приводящие к образованию вторичных посредников, вследствие чего развивается секреция тромбоцитарных гранул и синтез тромбоксана А2, что сопровождается резким усилением межтромбоцитарного взаимодействия.

В лабораторно-клинической практике коллаген чаще всего используют в конечной концентрации 50 мкг/мл, однако коллагены разных фирм могут обладать различной активностью, что необходимо учитывать при их применении.

Агрегация тромбоцитов с адреналином

Адреналин при контакте с тромбоцитами взаимодействует с α2-адренорецепторами, что вызывает ингибирование аденилатциклазы. Не исключено, что механизм, лежащий в основе реализации эффекта адреналина и развития первой волны агрегации, не зависит от образования тромбоксана А2, реакции высвобождения или синтеза фактора агрегации тромбоцитов, а связан со способностью адреналина прямо изменять проницаемость клеточной мембраны для ионов кальция. Вторая волна агрегация возникает как результат реакции высвобождения и продукции тромбоксана А2.

Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой

Арахидоновая кислота – природный агонист агрегации, причем ее действие опосредовано эффектами простагландинов G2 и H2, тромбоксана А2, и включает активацию как фосфолипазы C с последующим образованием вторичных посредников, мобилизацией внутриклеточного кальция и расширением процесса активации клеток, так и фосфолипазы А2, что непосредственно приводит к освобождению эндогенной арахидоновой кислоты. Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой происходит достаточно быстро, поэтому кривая, характеризующая этот процесс, чаще носит одноволновый характер.

Для индукции агрегации кровяных пластинок арахидоновую кислоту используют в концентрациях 10 -3 -10 -4 моль. При работе с арахидоновой кислотой следует учитывать, что на воздухе это вещество очень быстро окисляется.

Пробу на агрегацию с арахидоновой кислотой рекомендуют проводить в случаях использования лекарственных средств, влияющих на реакцию агрегации (например, ацетилсалициловая кислота, пенициллин, индометацин, делагил, диуретики), что нужно учитывать при оценке результатов исследований.

Тромбоцитарный гемостаз

Обследование пациентов с кровотечением требует тщательного анамнеза, в том числе семейного, сведений о приеме лекарственных препаратов, физикального обследования, и только после этого лабораторного исследования.

Количественные и функциональные нарушения тромбоцитов часто встречаются у пациентов с кровотечениями.

Типы нарушений функции тромбоцитов:

Болезнь фон Виллебранда (возможно — тромбоцитарный тип болезни фон Виллебранда)

Дефекты рецепторов TxA2

Дефект α-адренергических рецепторов

Дефицит плотных гранул

Расстройства, связанные с MYH9

До проведения специфических анализов, исследующих функциональные свойства тромбоцитов, рекомендуется выполнить следующие лабораторные тесты:

1. Общий анализ крови с определения количества тромбоцитов и среднего объема тромбоцитов. Это имеет значение при наследственной макротромбоцитопении (синдроме Бернара-Сулье), микротромбоцитопении (синдроме Вискотта-Олдрича), при некоторых заболеваниях костного мозга.
2. Изучение мазка крови и морфологии тромбоцитов. Необходимо для установления таких диагнозов, как псевдотромбоцитопения, синдром серых тромбоцитов. В некоторых случаях, например, при тромбоцитопении Хегглина мазок крови может показать наличие телец Деле (светло-серо-голубых овальных базофильных лейкоцитарных включений, расположенных в периферической цитоплазме нейтрофилов).

Специфические лабораторные тесты для определения функциональных свойств тромбоцитов включают в себя такие обследования как:

— скрининговые тесты, отражающие функциональную активность тромбоцитов, например, активированное время свертывания (АСТ), время кровотечения (ВК) и PFA-100,
— агрегометрия например, классическая агрегометрия по Борну,
— проточная цитометрия для количественной оценки наличия или отсутствия мембранных гликопротеинов тромбоцитов,
— специализированные исследования, применяемые в научно-исследовательских лабораториях.

Принцип метода агрегатометрии по Борну:

Метод измерения агрегации тромбоцитов турбидиметрическим методом по Born (по Борну) основан на регистрации изменений светопропускания в суспензии тромбоцитов. Эти изменения обусловлены снижением светорассеивания и увеличением светопропускания (прозрачности) суспензии в процессе образования тромбоцитарных агрегатов.

В классической агрегометрии по Борну используется плазма, богатая тромбоцитами (БТП). В агрегометре БТП перемешивается в кювете при температуре 37°С. При добавлении агониста образующиеся агрегаты тромбоцитов поглощают меньше света, что регистрируется фотоэлементом.

ОТП – обедненная тромбоцитами плазма, БТП – богатая тромбоцитами плазма.

Наглядно принципы агрегометрии по Борну можно увидеть на анимационной англоязычной презентации, любезно предоставленной авторами научного сайта http://www.platelet-research.org — http://www.platelet-research.org/3/aggregometry.htm.

Преаналитическая вариабельность

Препараты, блокирующие функции тромбоцитов, включают в себя НПВП (нестероидные противовоспалительные препараты), специфические антитромбоцитарные препараты, такие как клопидогрель, а также некоторые антибиотики, антидепрессанты, бета-блокаторы и пр. На функцию тромбоцитов могут влиять также такие продукты, как чеснок, куркума и кофеин, продукты с высоким содержанием жиров (они могут привести к появлению хиломикронов в плазме, что препятствует нормальному светопропусканию в процессе проведения тестирования агрегации тромбоцитов).
Ряд факторов может влиять на правильность результатов агрегации тромбоцитов:

— очень высокое или низкое количество тромбоцитов;

— температура — образцы крови для тестирования агрегации тромбоцитов следует хранить при комнатной температуре;

— рН — агрегацию тромбоцитов следует проводить при физиологическом значении рН;

Агонисты тромбоцитов:

Добавление агониста тромбоцитов к ОТП приводит к активации тромбоцитов, изменению их формы от дискоидной до сферической, которая связана с увеличением оптической плотности в процессе активации тромбоцитов. Единственным исключением из этого являются адреналин (эпинефрин), который не приводит к изменению формы тромбоцитов, и ристоцетин, который вызывает не агрегацию, а агглютинацию тромбоцитов.

Существуют два типа агонистов:

— сильные агонисты — коллаген, тромбин, ТхА2, арахидоновая кислота — непосредственно вызывают агрегацию тромбоцитов, синтез и секрецию ТхА2 гранул тромбоцитов.

— слабые агонисты — АДФ и адреналин — вызывают агрегацию тромбоцитов, не вызывая секреции.

Сильные агонисты при низких концентрациях могут действовать как слабые агонисты, но слабые агонисты, даже при высоких концентрациях, не будут действовать в качестве сильных агонистов.

С некоторыми слабыми агонистами (АДФ и адреналин) кривая агрегации тромбоцитов может иметь двухфазный вид — начальную волну агрегации (первичную волну), а затем вторичную волну агрегации, которая, как правило, необратима. При более высоких концентрациях АДФ две волны агрегации сливаются и двухфазный сигнал отсутствует.

Реакция агрегации к агонисту усиливается при высвобождении ТхА2 из фосфолипидов мембран и секреции АДФ из плотных гранул. АДФ и ТхА2 являются агонистами, которые, взаимодействуя с их специфическими рецепторами, усиливают реакцию агрегации тромбоцитов.

Рабочие концентрации используемых агонистов и механизм их действия:

АДФ связывается со своим рецептором на поверхности тромбоцитов. Первоначальное связывание приводит к высвобождению внутриклеточного кальция и изменению формы тромбоцита, ведущее к образованию первичной волны агрегации. Вторичная волна отражает высвобождение АДФ из гранул хранения тромбоцитов. Низкая доза АДФ вызывает лишь первичную агрегацию и ее эффект является обратимым.

АДФ связывается с двумя G-белками рецепторов P2Y1 и P2Y12. Связывание АДФ с рецептором P2Y1 вызывает изменение формы и инициирует агрегацию тромбоцитов (первичную волну) за счет мобилизации кальция. Рецептор P2Y12 считается основным АДФ-рецептором и ответственным за полную агрегацию тромбоцитов через ингибирование аденилциклазы.

Коллаген связывается с рецепторами GРVI и GРIa / IIa, индуцируя высвобождение содержимого гранул, пул TXA2, а затем приводит к устойчивой активации GPIIb-IIIa.Рецептор GРIa / IIa участвует в адгезии тромбоцитов. Рецептор GРVI участвует в передаче сигналов тромбоцитов и генерации TхA2.

Низкая –50 nmol/L

Используемая аббревиатура: БТП – бедная (обедненная) тромбоцитами плазма, ОТП – обогащенная тромбоцитами плазма, TхA2 — тромбоксан А2, С – концентрация, GP – гликопротеид.

Вид классической двухфазной кривой агрегации тромбоцитов:

При введении адреналина и низких доз АДФ обычно образуется двухфазная кривая агрегации, в то время как при введении других агонистов, либо при высоких концентрациях индукторов, возможно слияние первой и второй волн. При двухфазной агрегации вторая волна связана с реакцией высвобождения гранул тромбоцитов.

Параметры агрегатограммы.

Основные параметры агрегатограммы можно интерпретировать только после предварительной оценки активности тромбоцитов по типам кривых агрегатограммы (обратимая, двухфазная, необратимая и отсутствие агрегации тромбоцитов).

Основными параметрами агрегатограммы являются интенсивность первичной (Т_па), вторичной (Т_ва), максимальной агрегации (Т_ма) и дезагрегации (Т_да). О динамике процесса агрегации на графике следует судить по углам наклона кривой агрегатограммы на этапе первичной агрегации (α1), вторичной агрегации (α2) и дезагрегации (β). Характеристикой динамики реакции высвобождения эндогенных стимуляторов агрегации тромбоцитов является время латентного периода для коллаген-индуцированной агрегации (t_лп) и время начала вторичной агрегации (t_ва) в норме для двухфазных кривых агрегатограммы (высоких доз АДФ и адреналина).

Для агрегации, индуцированной коллагеном важно также оценить укорочение или удлинение латентного периода (t_лп) по сравнению с величиной этого показателя у здоровых людей.

Качественная оценка агрегатограммы позволяет не только диагностировать гипер- или гипореактивность тромбоцитов, но и предположить причины их возникновения. Для количественной регистрации различных типов агрегатограмм следует вычислять следующие показатели:

— при необратимой агрегации – Т_ма, Т_па, Т_да, T_ва, α1, α2, из которых самыми информативными являются Т_ва, α2 и T_ва;

— при обратимой агрегации – Т_ма и Т_да.

Диапазон колебаний основных показателей агрегатограммы:

Параметры агрегатограммы	Диапазон изменений	Параметры агрегатограммы	Диапазон изменений
Тма	30-50%	Tва	30-45 с
Тва	30-40%	α1	60-75 º
Тда	60-80% (от величины Тпа)	α2	60-75 º
Тпа	10-20%	β	30-45 º
tлп	25-30 с

Референсные значения

Агрегационная активность в норме составляет при использовании индукторов:

Агрегация тромбоцитов (Platelet Aggregation)

Уважаемые пациенты! Обращаем Ваше внимание, что приём биоматериала на данное исследование производится в медицинских офисах г. Челябинска по адресам: ул. Воровского, д. 62, пр-т Свердловский, д. 86, ул. Машиностроителей, 32, пр-т Комсомольский, д. 43-в, пр-т Победы, д. 388-б, строго по записи.

Основной функцией тромбоцитов в обеспечении гемостаза является остановка кровотечения путем формирования «белого» (тромбоцитарного) тромба в месте повреждения сосуда и участие в процессе свертывания крови путем образования «красного» (фибринового) тромба.

В отсутствии нарушения целостности сосудистой стенки тромбоциты находятся в неактивном состоянии. При воздействии определенных стимулов, наиболее значимым из которых является повреждение стенки кровеносного сосуда, они способны быстро активироваться.

Активация тромбоцитов – важный этап нормального гемостаза, при котором тромбоциты проявляют способность к адгезии (способность прилипать к поверхности, например, к интиме поврежденного сосуда) и агрегации (способность склеиваться друг с другом), что лежит в основе формирования тромбоцитарной пробки в месте повреждения. Инициированные тромбоциты секретируют биологически активные вещества, которые запускают каскадную реакцию с увеличением количества вовлеченных в процесс гемостаза тромбоцитов, сокращением стенки сосуда и свертыванием крови. Врожденные или приобретенные нарушения механизма активации тромбоцитов связаны с риском кровотечений. Тромбоциты обеспечивают не только нормальный гемостаз, но и участвуют в патогенетических механизмах некоторых заболеваний. Например, постоянное избыточное активирование тромбоцитов играет важную роль в патогенезе атеросклеротического поражения сосудов и возникновении тромботических осложнений атеросклероза. Применение аспирина и клопидогрела в лечении пациентов с высоким риском атеротромботических событий направлено на снижение способности тромбоцитов к агрегации.

Основными физиологическими индукторами активации тромбоцитов являются коллаген (главный белок внеклеточного матрикса тканей, обнажающийся при повреждении эндотелия сосудов), тромбин (белок плазменной системы свертывания), АДФ (аденозиндифосфат, выделяемый при разрушении клеток и вырабатываемый инициированными тромбоцитами), тромбоксан А2 (вторичный катализатор, секретируемый самими тромбоцитами при активации, его дополнительной функцией является стимуляция сужения сосудов). Стимулировать активацию тромбоцитов также способны арахидоновая кислота (предшественник тромбоксана А2), адреналин (содержится в гранулах тромбоцитов), серотонин (высвобождается с содержимым гранултромбоцитовна первых стадиях их активации).

Метод исследования агрегации тромбоцитов в системе in vitro основан на оценке светопропускающей способности обогащенной тромбоцитами плазмы пациента после добавления в нее индукторов агрегации (наиболее часто используются АДФ, коллаген, адреналин), под воздействием которых могут запускаться разные механизмы активации тромбоцитов. Комплексное их применение дает более полную информацию о реактивности тромбоцитов и позволяет предположить причину выявленных изменений.

Отдельное значение имеет применение в качестве индуктора антибиотика ристоцетина (ристомицина). Он вызывает агглютинацию с последующей агрегацией тромбоцитов, что наблюдается только при наличии в плазме кофактора процесса – фактора Виллебранда, а в тромбоцитах – рецепторов к нему. Эта реакция нарушена при болезни Виллебранда и синдроме Бернара-Сулье при сохранении способности к активации под действием других индукторов.

Исследование агрегации тромбоцитов обычно применяют при подозрении на наследственные нарушения их функции (при повышенной склонности к кровотечениям), оценке рисков кровотечения перед сложными оперативными вмешательствами или при беременности высокого риска.

Исследование остаточной реактивности тромбоцитов может давать информацию об эффективности или вариабельности терапии антиагрегантными препаратами. Однако эта область применения данного теста все еще нуждается в дальнейших исследованиях и стандартизации. По заключению профильной рабочей группы комитета по научным программам и стандартизации Международного общества по тромбозам и гемостазу (SSC/ISTH, 2013), убедительные данные в пользу того, чтобы рекомендовать лабораторные исследования функции тромбоцитов для мониторинга антиагрегантной терапии, пока отсутствуют. Метод оптической агрегометрии считается клинически адекватным при использовании в целях оценки функций тромбоцитов у пациентов с геморрагическими расстройствами, но пока не рекомендован к применению для идентификации пациентов с риском тромбозов или для мониторинга антитромбоцитарной терапии (кроме исследовательских целей).

• Агрегация тромбоцитов с АДФ (5,0 мкмоль/мл).
• Агрегация тромбоцитов с АДФ (0,5 мкмоль/мл).
• Агрегация тромбоцитов с адреналином.
• Агрегация тромбоцитов с коллагеном.

1. Проконсультироваться с лечащим врачом относительно возможности отмены препаратов, оказывающих наиболее значительное влияние на результаты теста. Прием нестероидных противовоспалительныхпрепаратов (НПВП) должен быть прекращен, по крайней мере, за три дня до исследования. Прием антиагрегантов (например, аспирина, производных тиенопиридинов) должен быть прекращен, по крайней мере, за десять дней до исследования. Если прием антиагрегантов не может быть прекращен, необходимо учитывать это влияние при оценке результатов. Следует указать в направлении все препараты, принимаемые пациентом в течение недели до исследования. Дополнительную информацию по лекарственным препаратам и веществам, которые могут оказывать определенное влияние на результаты теста, см. раздел «Интерпретация».
2. Целесообразно воздержаться в течение 4 часов перед исследованием от приема пищи, особеннос высоким содержанием жиров, для исключения мутности пробы. Исключить как минимум за 2 часа до исследования употребление напитков, содержащих кофеин (кофе, чай), воду пить можно.
3. Не курить, по крайней мере, в течение 30 минут перед взятием пробы крови.
4. Пациент должен находиться в покое 15-20 минут пред исследованием.

• геморрагические расстройства;
• расширенные исследования перед оперативным вмешательством, при беременности высокого риска;
• для оценки остаточной реактивности или резистентности тромбоцитов при применении антитромбоцитарных препаратов (в исследовательских целях).

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

• Агрегация тромбоцитов с АДФ (5,0 мкмоль/мл): 60-90%
• Агрегация тромбоцитов с АДФ (0,5 мкмоль/мл): 1,4-4,3%
• Агрегация тромбоцитов с адреналином: 40-70%
• Агрегация тромбоцитов с коллагеном: 50-80%

Интерпретацию результатов проводит лечащий врач с учетом анамнеза, клинической ситуации, недавнего и текущего приема лекарственных препаратов и результатов других исследований.

Таблица. Изменения агрегации тромбоцитов под действием применяемых индукторов при некоторых вариантах патологии гемостаза

Вариант патологии гемостаза	Агрегация тромбоцитов под действием индукторов
	АДФ	Адреналин	Коллаген
Тромбоцитопатия	N / ↓↓	N / ↓↓	N / ↓↓
Влияние ацетилсалициловой кислоты или других НПВП	N / ↓↓	↓↓	N
Влияние клопидогрела и тиклопидина	↓↓↓	N / ↓	N / ↓
Нарушение пула хранения гранул	N / ↓↓	↓↓	N / ↓
Дефект рецептора коллагена	N	N	↓↓↓ / 0
Дефекты активности тромбоксан-синтетазы	↓↓	↓↓	↓
Аномалия фосфолипазы А2	↓↓	↓↓	↓
ТромбастенияГланцмана
Афибриногенемия	↓↓ / 0	↓↓ / 0	↓↓ / 0

• N – нормальная агрегация
• ↓ – умеренное снижение
• ↓↓ – снижение
• ↓↓↓ – выраженное снижение
• 0 – отсутствие агрегации

Состояния, ассоциированные с повышенной реактивностью тромбоцитов: ишемическая болезнь сердца, цереброваскулярные расстройства, атеросклероз периферических артерий, острый коронарный синдром, стентирование коронарных артерий, сахарный диабет, антифосфолипидный синдром, миелопролиферативные расстройства, гепарин-индуцированная тромбоцитопения. Повышенная реактивность может быть обнаружена и у некоторых здоровых людей (чаще отмечается у женщин, есть связь с уровнем фибриногена, возможны генетические особенности).

Таблица препаратов, влияющих на функции тромбоцитов (цит. по: Guidelines for the Laboratory Investigation of Heritable Disorders of Platelet Function. British Committee for Standards in Haematology. 2011).

Агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой (венозная кровь) в Москве

Исследование предназначено для функциональной оценки одного из звеньев процесса свертывания крови – агрегации, или склеивания, тромбоцитов. В качестве биохимического индуктора агрегации в анализе используется арахидоновая кислота.

Этот анализ принимается по сокращённому графику. Это связано с тем, что биоматериал должен попасть в лабораторию в очень короткий срок. Проверьте расписание сокращённого графика приёма на странице вашего отделения. При сдаче вне графика срок выполнения исследования может быть увеличен на 1-3 дня.

• Об исследовании Обзор
• Как подготовиться? Подготовка
• Расшифровка Результат

Приём и исследование биоматериала

Подробное описание исследования

Внимание! Исследование доступно в отделениях:

г. Москва, Рождественский б-р, д. 21с2

г. Москва, ул. Ангарская, д. 28 к.2

г. Москва, ул.Новогиреевская 24, корп.1

г. Москва, 11-я улица Текстильщиков, д. 11

г. Москва, ул. Декабристов, д. 21

г. Москва, ул. Москворечье, д. 4к6

г. Москва, ул. Ладожская д. 8

г. Москва, Мичуринский проспект, 7к1

г. Москва, Ломоносовский пр-т, д.23

г. Москва, Хамовнический Вал ул, дом 14

г. Москва, Профсоюзная ул, дом 104

г. Москва, Электрозаводская ул, дом 37/4, стр. 7

г. Москва, Снежная ул, дом 17, корпус 1

г. Москва, Красного Маяка ул, дом 1, корпус 1, офис 109

г. Москва, Новочеркасский бульвар, д. 55

г. Москва, ул. Перерва, д. 49

г. Москва, ул. Русаковская, д. 31

г. Москва, ул. Халтуринская, д. 18

г. Москва, Шоссе Энтузиастов, д. 11А, корп. 2

г. Москва, ул. Ярцевская, д. 11, корп. 1

г. Мытищи, ул. Мира, д. 15, корп. 12

г. Мытищи, ул. Веры Волошиной, д. 46

г. Люберцы, Октябрьский пр-т д. 183

Сдать можно только по предварительной записи. Запись осуществляется по многоканальному телефону: 8 800 550 13 13 (звонок по России бесплатный).

Система гемостаза, или система свёртывания крови, выполняет две ключевых функции:

• сохраняет кровь, находящуюся в сердечно-сосудистой системе, в жидком состоянии;
• мгновенно реагирует на повреждения сосудов, формируя тромбы в процессе свёртывания, чем защищает организм от кровопотери.

К основным элементам системы свёртывания относят обширную группу белков и небелковых факторов свёртывания. Одним из важнейших элементов системы гемостаза являются тромбоциты, или кровяные пластины, – это видоизменённые клетки крови. Их основная функция – это участие в образовании тромба.

В нормальных физиологических условиях тромбоциты циркулируют в кровяном русле в неактивном состоянии. При нарушении целостности сосудистой стенки и взаимодействии тромбоцитов с высвободившимися биохимическими веществами, запускается процесс активации тромбоцитов и свертывания крови.

К группе основных активаторов (индукторов) кровяных пластинок можно отнести следующие вещества:

• аденозиндифосфат (АДФ);
• адреналин;
• коллаген;
• тромбин (фактор свертывания II)
• фактор фон Виллебранда
• ристомицин (ристоцетин), который используется в лабораторных условиях.

Данное исследование направлено на проведение агрегации тромбоцитов при помощи арахидоновой кислоты – чрезвычайно важной молекулы-индуктора, которая активирует тромбоциты в зоне повреждения кровеносного сосуда.

Активированные тромбоциты участвуют в процессе первичного и вторичного гемостаза. Оба процесса являются элементами защиты организма от кровотечения. Первый процесс обычно протекает в сосудах малого калибра, второй – в крупных сосудах.

Первичный гемостаз основан на прикреплении кровяных пластинок к коллагену поврежденного сосуда и склеивании (агрегации) тромбоцитов между собой. В результате этого процесса образуется так называемая первичная «тромбоцитарная пробка». Во вторичном гемостазе происходит образование кровяного сгустка при помощи последовательной активации белков-факторов свертывания. Тромбоциты поддерживают этот биохимический каскад реакций и входят в состав кровяного сгустка, который прочно закрывает просвет поврежденного сосуда и препятствует дальнейшему кровотечению. Арахидоновая кислота индуцирует как первичный, так и вторичный гемостаз.

При различных заболеваниях процесс активации тромбоцитов может нарушаться. При увеличении степени агрегации кровяных пластинок повышается риск образования патологических кровяных сгустков (тромбов). Уменьшение степени агрегации тромбоцитов ассоциировано с повышением риска кровотечений.

Арахидоновая кислота – природный агонист агрегации, причем ее действие опосредовано эффектами простагландинов G2 и Н2 и тромбоксана, что включает в свою очередь активацию как фосфолипазы С с последующим образованием вторичных посредников, мобилизацией внутриклеточного кальция и расширением процесса активации клеток, так и фосфолипазы А2, что непосредственно приводит к освобождению эндогенной арахидоновой кислоты. Арахидоновая кислота является предшественником тромбоксана (TхA2) в тромбоцитах. Арахидоновая кислота превращается в TхA2 при участии циклооксигеназы и тромбоксан-синтетазы. ТхА2 является мощным индуктором агрегации тромбоцитов, вызывая высвобождение гранул, образование еще большей генерации и затем устойчивой активации рецепторов мембранного белка.

Пробу на агрегацию с арахидоновой кислотой рекомендуют проводить в случаях использования лекарственных средств, влияющих на реакцию агрегации (например, ацетилсалициловая кислота, пенициллин, индометацин, делагил, диуретики), что нужно учитывать при оценке результатов исследований.

Тромбоцитопатии могут быть врожденными или приобретенными. Последний тип функциональной неполноценности тромбоцитов встречается гораздо чаще и может развиться на фоне следующих причин:

• Использование клопидогрела; ацетилсалициловой кислоты и других антиагрегантов (препаратов, препятствующих склеиванию тромбоцитов).
• Хроническая почечная недостаточность.
• Онкологические заболевания кроветворной и лимфатической системы.
• Злоупотребление алкоголем.
• На фоне приема ряда лекарственных средств из группы бета-блокаторов, блокаторов кальциевых каналов, ксантинов.

Данный лабораторный анализ рекомендуется сдавать при наличии показаний от лечащего врача.

Другие названия этого исследования

Platelet aggregation with arachidonic acid

Подготовка к исследованию

• Кровь необходимо сдавать натощак (между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 8-ми часов, воду можно пить в обычном режиме), накануне исследования легкий ужин с ограничением приема жирной пищи.
• Накануне исследования (в течение 24 часов) исключить алкоголь, интенсивные физические нагрузки, прием лекарственных препаратов (по согласованию с врачом).
• За 1-2 часа до сдачи крови воздержаться от курения, не употреблять сок, чай, кофе, можно пить негазированную воду. Исключить физическое напряжение (бег, быстрый подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. За 15 минут до сдачи крови рекомендуется отдохнуть, успокоиться.
• Не следует сдавать кровь для лабораторного исследования сразу после физиотерапевтических процедур, инструментального обследования, рентгенологического и ультразвукового исследований, массажа и других медицинских процедур.
• При контроле лабораторных показателей в динамике рекомендуется проводить повторные исследования в одинаковых условиях – в одной лаборатории, сдавать кровь в одинаковое время суток и пр.

Противопоказания и ограничения

Абсолютных противопоказаний нет.

Интерпретация результата

Показатель агрегации представлен в виде процентного числа и отражает степень агрегации тромбоцитов. Референсные значения отсутствуют, интерпретацию результатов должен осуществлять лечащий врач.