Диагностика гепатита С: методы, анализы и виды ПЦР

Гепатит С: какие анализы нужно сдать

Согласно эпидемиологическим данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), на 2017 год в мире насчитывается около 150 миллионов человек, которые были инфицированы вирусом гепатита С. Гепатит С — это опасное вирусное заболевание печени. Этот вирус может приводить к развитию как острой, так и хронической формы гепатита, которая варьируется по тяжести – от легкой болезни, продолжающейся несколько недель, до серьезной пожизненной болезни. При своевременной диагностике и правильно подобранном лечении данная патология полностью излечима, особенно, если не медлить со сдачей анализов на выявления гепатита С в крови. Иначе последствия могут быть трагическими — гепатит С часто приводит к развитию необратимых изменений, потенциально угрожающих для жизни.

Благодаря наличию в своих стенах современного медицинского оборудования, Юсуповская больница занимается диагностикой всех видов вирусных гепатитов. В клиники терапии каждому пациенту окажут не только квалифицированную помощь от специалистов высшей категории с многолетним стажем работы, но и понимание, поддержку в его нелегкой борьбе с ужасным заболеванием.

Гепатит С: что нужно знать пациенту

Гепатит С — один из самых коварных и смертельных вирусов. В 90% случаев протекают бессимптомно. Из-за способности маскировать истинную причину под видом множества других заболеваний, его прозвали «ласковый убийца». Если болезнь все-таки дала о себе знать, активная ее фаза делится на два основных периода: преджелтушный и желтушный. В первом (раннем) периоде отмечаются такие характерные для вирусных инфекций симптомы, как:

• общая слабость;
• кожный зуд;
• расстройства пищеварения: тошнота, рвота, диарея;
• повышение температуры тела до 38°С;
• головные боли, миалгия, артралгия.

На втором (желтушном) периоде, когда поражена печень, в кровь выбрасывает большое количество билирубина — желтого пигмента. Именно благодаря иктеричному окрашиванию кожных покровов пациента становится очевидно, что у него присутствуют явные проблемы с печенью, и назначается комплекс лабораторных исследований крови, мочи и кала.

Однако многие случаи заражения протекают бессимптомно, без характерной клинической картины. После инкубационного периода, который длиться от пары недель до пары месяцев, пациент может и не подозревать, что он является носителем вируса не только в продромальной (преджелтушной) стадии, но и в желтушной — по причине отсутствия ее как таковой. Например, в 2/3 всех случаев гепатит С проходит в атипичной (безжелтушной, или субклинической) форме.

Анализ гепатит С: особенности и подготовка

Всегда кровь на биохимический анализ сдается строго натощак, непосредственно в утренние часы, до полудня. Это обусловлено суточными ритмами в организме человека, которые влияют на содержание гормонов в крови. Количественный анализ на гепатит С (антигены и антитела) сдается в любое время суток, но тоже, обязательно, натощак: важно не принимать пищу в течение 4–6 часов до забора крови. В обоих случаях используется венозная кровь, которая как биоматериал более качественна, чем капиллярная либо артериальная.

Накануне сдачи любых анализов крови рекомендуется избегать чрезмерных физических и психоэмоциональных нагрузок, приема алкоголя и тяжелой пищи. Питьевой режим должен быть обычным.

Количественные и качественные анализы на гепатит С

Этот вид гепатита имеет шесть разновидностей, поэтому анализы необходимо проводить в комплексе. К группе риска относятся люди, принимающие внутривенные наркотики (кокаин, героин), ведущие беспорядочную половую жизнь, медработники (особенно хирурги и анестезиологи), а также пациенты, которым показаны гемодиализ или переливания крови.

В профилактических целях либо при подозрении вирусное поражение печени сдаются следующий качественный и количественный анализ на гепатит С:

• Анализ на anti-HCV-total (антитела к антигенам вируса гепатита C). Качественный анализ. Положительный результат означает инфицирование или период восстановления после перенесенной инфекции. Отрицательный результат – инкубационный период;
• Определение РНК (HCV-RNA) в сыворотке или плазме крови. Может быть качественным и количественным. При качественном анализе результат «обнаружено» подтверждает заражение гепатитом C. Отрицательный результат говорит об отсутствии вируса в крови пациента;

При количественном анализе плазмы крови на гепатит С:

• «не обнаружено»: РНК гепатита С не выявлена;
• 100 000 000 МЕ/мл: результат интерпретируется как: «РНК гепатита С выходит за пределы линейного диапазона, тест ставился в разведении 1: Х».

При количественном анализе сыворотки крови на гепатит С:

• «не обнаружено»: РНК гепатита С не выявлена;
• 2 до 10 8 МЕ/мл: результат положительный;
• 10 8 МЕ/мл: результат положительный, концентрация РНК гепатита С более 108 МЕ/мл.
• Определение антител IgG (recomBlot HCV IgG). Качественный тест. Отрицательный результат говорит об отсутствии инфицирования. Положительный результат – пациент был инфицирован ранее. Сомнительный результат – возможно, была инфекция.

Расшифровка анализа крови на гепатит С

Расшифровка анализа крови на гепатит С и верификация диагноза, с учетом клинической и эпидемиологической картины, под силу только специалисту.

При отрицательном результате в крови, по итогам всех проведенных тестов, не находят никаких маркеров вирусного гепатита. Тогда можно говорить об отсутствии заболевания. Однако в некоторых случаях врачи рекомендуют сделать анализы повторно через две недели.

При положительном результате анализа на гепатит проводится повторный уточняющий анализ через две-три недели. Возможен вариант, когда пациент только что переболел острой формой вирусного гепатита и маркёры в крови пока еще сохраняются.

Анализ на гепатит С: цена, Москва

Стоимость анализа на гепатит С в частных клиниках Москвы варьируется в диапазоне от 500-2000 рублей. Качественный анализ на гепатит С стоит в среднем 700 рублей. Количественный анализ на гепатит С методом ПЦР обойдется жителям Москвы примерно в 2500 рублей.

Юсуповская больница специализируется на диагностике и проведении анализов на выявление всех типов вирусных гепатитов. В стационаре клиники работает собственная современная лаборатория, сотрудники которой постоянно усовершенствуются в своей профессии и проходят специальные курсы по повышению квалификации. В больнице разрабатывают новые медикаментозные методики лечения различных видов вирусных гепатитом, в том числе и гепатит С. Ответственность перед каждым пациентом и высокий уровень профессионализма сотрудников – это визитная карточка Юсуповской больницы. Для записи на прием, звоните по телефону.

Методы исследования вирусов гепатита

В основе всех серологических реакций лежит взаимодействие антигена и антитела.

Метод обнаружения с диагностической целью антител в сыворотке крови обследуемого .

В этом случае из двух компонентов реакции (антитело, антиген) неизвестным является сыворотка крови, так как постановка реакции проводится с заведомо известными антигенами. Положительный результат реакции свидетельствует о наличии в крови антител, соответствующих применяемому антигену; отрицательный результат указывает на отсутствие таковых.

Достоверные результаты получают при исследовании «парных» сывороток крови больного, взятой вначале заболевания (3-7 день) и через 10-12 дней. В этом случае удается наблюдать динамику нарастания антител. При вирусных инфекциях лишь четырехкратное и более повышение титра антител во второй сыворотке имеет диагностическое значение.

С внедрением в практику лабораторий метода иммуноферментного анализа (ИФА) стало возможным определять в крови больных антитела, относящиеся к различным классам иммуноглобулинов (JgM и JgG), что существенным образом повысило информативность серологических методов диагностики.

При первичном иммунном ответе, когда иммунная система человека взаимодействует с инфекционным агентом в первый раз, синтезируются преимущественно антитела, относящиеся к иммуноглобулинам класса М ( JgM ) . Лишь позднее, на 8-12-й день после попадания антигена в организм, в крови начинают накапливаться антитела иммуноглобулинов класса G ( JgG ) . При иммунном ответе на инфекционные агенты вырабатываются также и антитела класса А ( JgA ), которые играют важную роль в защите от инфекционных агентов кожи и слизистых оболочек.

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Полимеразная цепная реакция (ПЦР), являющаяся одним из методов ДНК-диагностики, позволяет увеличить число копий детектируемого участка генома (ДНК) бактерий или вирусов в миллионы раз с использованием фермента ДНК-полимеразы. Тестируемый специфический для данного генома отрезок нуклеиновой кислоты многократно умножается (амплифицируется), что позволяет его идентифицировать. Сначала молекула ДНК бактерий или вирусов нагреванием разделяется на 2 цепи, затем в присутствии синтезированных ДНК-праймеров (последовательность нуклеинов специфична для определяемого генома) происходит связывание их с комплементарными участками ДНК, синтезируется вторая цепь нуклеиновой кислоты вслед за каждым праймером в присутствии термостабильной ДНК-полимеразы. Получается две молекулы ДНК. Процесс многократно повторяется.

Для диагностики достаточно одной молекулы ДНК, т. е. одной бактерии или вирусной частицы. Введение в реакцию дополнительного этапа — синтеза ДНК на молекуле РНК при помощи фермента обратной транскриптазы — позволило тестировать РНК-вирусы, например вирус гепатита С.

ПЦР — это трехступенчатый процесс , повторяющийся циклично: денатурация, отжиг праймеров, синтез ДНК (полимеризация). Синтезированное количество ДНК идентифицируют методом иммуноферментного анализа или электрофореза.

Преимущество ПЦР в диагностике инфекционных заболеваний перед другими методами исследований заключается в следующем:
• возбудитель инфекции может быть обнаружен в любой биологической среде организма, в том числе и в материале, получаемом при биопсии;
• возможна диагностика инфекционных болезней на самых разных стадиях заболевания;
• возможность количественной оценки результатов исследований ( сколько вирусов или бактерий содержится в исследуемом материале);
• высокая чувствительность метода.

Исследования вирусов гепатита

В настоящее время выделяют следующие формы вирусных гепатитов: гепатит А, гепатит В, гепатит С, гепатит D, гепатит Е, гепатит G и гепатит ТТ. Для диагностики каждой из перечисленных форм вирусных гепатитов используется определенный перечень маркеров.

Вирусный гепатит А

Гепатит А — острая энтеровирусная инфекция. Возбудитель — вирус гепатита А (ВГА,HAV) — энтеровирус типа 72. Геном вируса представлен однонитчатой РНК. Вирус гепатита А содержит единственный антиген (HA-Ag). Удельный вес гепатита А в суммарной заболеваемости вирусными гепатитами составляет 70-80%. В структуре заболеваемости гепатитом А дети составляют до 80%, причем основная масса — дошкольники и школьники начальных классов.

Вирусный гепатит В

Гепатит В – вирусная антропонозная инфекция. Возбудитель вирус гепатита В (ВГВ, HBV) – относится к семейству гепаднавирусов, ДНК-содержащих вирусов, поражающих клетки печени. Вирионы ВГВ имеют наружную липопротеидную оболочку и нуклеокапсид, содержащий двунитчатую ДНК и ДНК-зависимую ДНК-полимеразу.

В структуре ВГВ (HBV) выделяют следующие антигенные системы:
• поверхностный («австралийский») антиген, HBsAg, находящийся в составе липопротеидной оболочки ВГВ, является маркером ВГВ, указывая на инфицированность вирусом;
• ядерный (core), HBcAg – обнаруживается в составе нуклеокапсида вирионов, свидетельствует об активной репродукции вируса;
• HBeAg – входит в состав ядра ВГВ, указывая на активность вируса и, кроме того, на его высокую вирулентность и инфицированность;
• HBxAg – расположен вблизи оболочки вириона, его роль в генезе инфекции изучается.

В диагностике вирусного гепатита В ведущее значение имеет определение комплекса маркеров гепатита. Свыше 5% населения планеты охвачено этой инфекцией, а частота безжелтушных форм ВГВ составляет, по данным разных авторов, от 60 до 82%.

Вирус гепатита С, генотипы

Гепатит С (ВГС) – вирусное заболевание, наиболее часто протекающее в виде посттрансфузионного гепатита с преобладанием безжелтушных и легких форм и склонное к хронизации процесса.

Возбудитель – вирус гепатита С – имеет сходство с флавовирусами, содержит РНК. На основе филогенетического анализа выделено 6 генотипов ВГС и более 80 субтипов.

Генотип 1 – наиболее распространенный генотип во всем мире (от 40 до 80%). Генотип 1а является доминирующим для США, а 1b преобладает в Западной Европе и Южной Азии.

Генотип 2 распространен во всем мире, однако встречается с меньшей частотой, чем генотип 1 (от 10 до 40%).

ВГС тип 3 характерен для Индии, Пакистана, Австралии и Шотландии. Генотип 4 распространен преимущественно в Средней Азии и Египте, генотип 5 – в Южной Африке, а генотип 6 – в Гонконге и Мокао.

Примерно 90% всех случаев посттрансфузионных гепатитов связано с ВГС. Среди доноров антитела к вирусу гепатита С (анти-ВГС) обнаруживают в 0,2-5% случаев.

У 40-75% пациентов регистрируется бессимптомная форма болезни, у 50-75% больных острым ВГС формируется хронический гепатит, у 20% из них развивается цирроз печени. Важная роль ВГС отводится и в этиологии гепатоклеточной карциномы.

Геном вируса гепатита С представлен одноцепочечной положительно заряженной РНК, которая кодирует 3 структурных и 5 неструктурных белков. К каждому из этих белков вырабатываются антитела, обнаруживаемые в крови больных гепатитом С.

Отличительной чертой ВГС является волнообразное течение заболевания, в котором разграничивают 3 фазы: острую, латентную и фазу реактивации.
Для острой фазы характерно повышение активности печеночных ферментов в сыворотке крови, уровня антител класса IgM и IgG к ВГС с нарастанием титров, а также РНК ВГС.

Латентная фаза характеризуется отсутствием клинических проявлений, наличием в крови антител класса IgG к ВГС в высоких титрах, отсутствием антител класса IgM и РНК ВГС либо их присутствием в низких концентрациях на фоне незначительного повышения активности печеночных ферментов в периоды обострения.
Для фазы реактивации характерно появление клинических признаков, повышение активности печеночных ферментов, наличие антител класса IgG (к нуклеокапсидному белку core и неструктурным белкам NS) в высоких титрах, присутствие РНК ВГС и нарастание титров антител класса IgM к ВГС в динамике.

Вирусный гепатит D

Гепатит D – вирусная инфекция, вследствие биологических особенностей вируса протекающая исключительно в виде ко- или суперифекции при гепатите В, характеризующаяся тяжелым течением,
часто неблагоприятным исходом.

Самостоятельно, без вируса В, вирус гепатита D не может попасть в организм человека

Возбудитель – вирус гепатита D (ВГD), по своим биологическим свойствам приближается к вироидам – обнаруженным молекулам нуклеиновых кислот. Печень человека – единственное место размножения (репликации) ВГD.

Известно существование двух вариантов инфекции: коинфекция (одновременное заражение ВГВ и ВГD) и суперинфекция (заражение HBsAg-позитивных пациентов). Сочетание ВГВ и ВГD сопровождается развитием более тяжелых форм патологического процесса, что определяется главным образом действием ВГD.

Летальность при суперинфекции достигает 15-20%. Инфицирование дельта-вирусом может вызывать острое заболевание, заканчивающееся выздоровлением, или формировать хроническое носительство ВГD.

При гепатите D могут отсутствовать в крови маркеры гепатита В – анти НВс и НВs-антиген – и наблюдается угнетение ДНК-полимеразной активности, так как ВГD ингибирует репликацию вируса гепатита В.

Особенности диагностики вирусных гепатитов

В предыдущей статье мы кратко рассказали о распространённых вирусах А, В и С-гепатита и важности их ранней диагностики. Вирусы, вызывающие воспалительные заболевания печени, несмотря на то, что орган-мишень у них один, отличаются по структуре и по клиническим проявлениям. Поэтому диагностика каждого гепатита (С, B, G и D др.) имеет характерные нюансы, связанные с их особыми свойствами.

Особые свойства гепатита В:

• Генетический материал – основная часть вируса – представлен двойной цепочкой ДНК.
• По-другому его называют «сывороточный гепатит», потому что для заражения достаточно попадания в кровь крайне малого количества вируса. То есть объём зараженной крови для передачи вируса может быть совсем небольшим.
• Высокая опасность заражения стала одной из причин, по которой прививка от гепатита В вошла в календарь иммунизации и проводится детям, медицинским работникам и рекомендуется всем остальным.
• Особенно часто переходит в хроническую форму у детей.
• Является вирусом-помощником для существования гепатита D. Без него дельта-гепатит не жизнеспособен.
• Самая опасная – молниеносная форма болезни, которая приводит к быстрой массовой гибели печеночных клеток и развитию комы, в большинстве случаев развивается из-за комбинированной инфекции гепатитом B и D.

Особые свойства гепатита С:

• Его еще называют вирус «ни А ни В» гепатита. В отличие от возбудителя типа В, этот содержит весь свой генетический материал в одной цепочке РНК.
• Антигены вируса находятся в крови в очень низкой концентрации, что создает серьезные трудности в его обнаружении.
• Иногда называют «посттрансфузионным гепатитом», потому что заражение нередко происходило при переливании крови.
• Считается наиболее опасной для здоровья формой вирусного гепатита, способствующей развитию онкологии печени и фиброзных изменений в органе.
• Вирус гепатита G в комбинации с вирусом гепатита С может стать причиной цирроза печени. Сочетание двух этих вирусов ухудшает прогноз, несмотря на проводимое лечение.
• Редко сопровождается желтухой и подъёмом температуры, в отличие от гепатита В. Поэтому острая фаза гепатита С способна маскироваться под пищевое отравление, грипп и т.д.

Особые свойства гепатитов D и G:

• Вирус дельта-гепатита (D) способен к размножению и активной жизнедеятельности только если уже имеется заражение гепатитом В. Вместе они формируют более тяжелые формы поражения органа (в том числе и молниеносную), создавая серьезные трудности в лечении и усиливая разрушение клеток печени.
• Вирус типа G считается самостоятельным возбудителем гепатита. Проявления могут быть схожи с заражением С-вирусом, но протекает заболевание легче. Способен проходить в острой и хронической форме. Очень часто обнаруживается в сочетании с РНК гепатита С, что ухудшает прогноз заболевания.
• Заражение гепатитами D и G особенно вероятно для инъекционных наркоманов, любителей тату и пирсинга на дому, а также при беспорядочных сексуальных связях.
• Раннее выявление этих двух видов вирусного гепатита имеет огромное значение для прогнозирования дальнейшего развития болезни и подбора схемы лечения. Для этого используется самый точный метод идентификации вирусных частиц – ПЦР.

Когда необходима лабораторная диагностика?

Точно поставить диагноз вирусного гепатита и определить его тип возможно только с помощью лабораторной диагностики.

Вирусное поражение печени можно заподозрить при:

• Гриппоподобных симптомах (слабость, повышение температуры, боли в мышцах). Иногда они бывают единственными проявлениями острой фазы болезни, особенно при инфицировании гепатитом С или G.
• Симптомах, схожих с ревматоидными заболеваниями – ломоте и боли в суставах.
• Болях в подреберье справа, желтухе, потемнении мочи и обесцвечивании кала.
• Периодически беспокоящей тошноте, рвоте, беспричинной слабости, которая усиливается к вечеру.

Поэтому рекомендуется провести анализ на гепатиты В и С, D и G, если беспокоят подобные симптомы и нет других известных причин их появления.

Виды лабораторной диагностики гепатитов B, C, D, G

Универсальный биологический материал для выявления вирусных гепатитов – это венозная кровь.

Анализ ПЦР-методом (генетический анализ)

Сейчас это «золотой стандарт» для диагностики вирусных гепатитов B, C, D, G. Он нацелен на обнаружение ДНК или РНК возбудителя в крови. Метод обладает высокой точностью и позволяет не только обнаружить факт инфицирования, но и оценить количество вирусных частиц в крови, а также определить генотип вируса (это особенно актуально для гепатита С). Такие уточнения бесценны при выборе правильной схемы лечения.

Иммунологический метод

Направлен на обнаружение антител к вирусу, которые вырабатывает иммунная система, а также на выявление антигенов (частей самого вируса) в биоматериале. Метод позволяет оценить титр антител и антигенов (концентрацию этих частиц в плазме крови). По этим данным тоже можно судить об активности вируса и динамике изменений. Но методика имеет больший процент ошибок.

Анализы на гепатиты могут выполнять разные задачи:

• Качественный анализ направлен на установление факта наличия материала вируса в крови.
• Количественный анализ на гепатиты С и В определяет концентрацию вируса в крови, что имеет значение для выбора и коррекции терапии.

Сколько раз нужно проходить обследование на гепатит при положительном результате?

Поскольку вирусное поражение печени имеет серьёзные последствия и требует приёма определённых препаратов, постановка диагноза должна быть точной. Поэтому после первого положительного результата теста на гепатит необходим дополнительный подтверждающий анализ.

Первый анализ на гепатиты B, С, D, G может быть проведён с помощью иммунологического метода, который направлен на обнаружение антител вируса в крови. Если результат положителен, высокоточный анализ-ПЦР помогает подтвердить или опровергнуть предполагаемый диагноз. Генетический метод ПЦР позволяет оценить количество вирусных частиц в крови (показатели «вирусной нагрузки»). Эти данные используются при выборе лечения и контроле за его результатами.

При отрицательном результате:

• Действуйте в соответствии с рекомендациями лечащего доктора. Если остаются подозрения на вирусное поражение печени (симптомы, результаты других методов обследования), можно будет повторить анализ или выполнить диагностику методом ПЦР вместо определения антител в крови.
• Обследоваться на гепатиты также нужно, если имеются факторы риска заражения – уколы и травмы нестерильными острыми предметами, которые не являются объектами только Вашего использования (иголки, ножницы и др.), переливания крови, нанесение татуировок и пирсинг, регулярное посещение процедуры маникюра и педикюра в салонах и у мастеров на дому и т.д.

Особенности диагностики гепатитов С и В:

• Очень малое количество антигена гепатита С в крови, по сравнению с вирусом типа В. Поэтому ПЦР-диагностика предпочтительнее, для точной постановки диагноза С-гепатита и наблюдения за динамикой.
• Хронические гепатиты В и С могут длительное время проходить с минимальными клиническими проявления или протекать абсолютно бессимптомно до наступления масштабных необратимых изменений в печени. Поэтому часто вирусные поражения печени обнаруживают случайно – при профилактических осмотрах, обследовании перед госпитализацией по другим поводам и т.д.
• Если есть сомнения по поводу диагноза, анализ требует повторения, так как в редких случаях возможны ложноотрицательные результаты.
• После первого положительного анализа крови на гепатит С и В обязательно проводится повторный тест для подтверждения или исключения диагноза.
• Следует вспомнить об этих особенностях, если Вас беспокоят проблемы со здоровьем, но Вы откладываете визит к врачу, считая их незначительными или временными.

Обследование при вирусных гепатитах и подозрении на них

Проходить обследование при подозрении на болезни печени необходимо под руководством специалиста. Доктор, оценив жалобы и симптомы, предоставит Вам перечень тестов, которые необходимо пройти. Окончательный диагноз формулируется только на основании совокупности данных осмотра, лабораторной и инструментальной диагностики:

• Определение факта наличия вируса или антител к нему, а также оценка «вирусной нагрузки», выявление особенностей вируса (иммунологический метод и метод ПЦР).
• Определение биохимических показателей состояния печени. Оцениваются печёночные ферменты АЛТ и АСТ, белок, билирубин, щелочная фосфатаза и т.д. Изменения этих показателей дают представление о признаках разрушения клеток печени и степени нарушения её нормальных функций.
• Визуализация состояния печёночной ткани. Обычно проводится с помощью УЗИ, МРТ, эластография (аппаратом «Фиброскан»). Позволяет видеть площадь поражения органа, признаки фиброзных изменений, появление новообразований. Для более подробной оценки состояния органа проводят биопсию печени
• Развёрнутый общий анализ крови, оценка свёртываемости (коагулограмма). Изменения этих показателей также могут дать врачу важную информацию о состоянии печени, поскольку данный орган принимает участие в синтезе компонентов системы свёртывания крови.
• Дополнительно: анализ на гормоны, анализы на аутоиммунные заболевания. В процессе планирования и проведения терапии доктору может понадобиться оценить функцию вашей щитовидной железы и другие показатели эндокринных функций, а также выявить наличие ревматоидного фактора.

Лабораторная диагностика абсолютно незаменима при вирусных гепатитах (С, В, D, G). В Lab4U Вы можете пройти полный перечень необходимых анализов по доступным и выгодным ценам:

Анализ ПЦР на гепатит C

По оценкам ВОЗ, в 2020 г. во всем мире было зарегистрировано свыше 1,5 млн новых случаев заражения вирусом гепатита С (ВГС) или гепатотропным РНК-вирусом, передаваемым через кровь. Основные способы передачи вируса включают инъекционное употребление наркотиков, небезопасные методы инъекций, переливание крови и повторное использование или недостаточная стерилизация медицинского оборудования, в частности шприцев и игл, в учреждениях здравоохранения. Гепатит С не передается через грудное молоко, пищевые продукты, воду или при бытовых контактах, например, объятиях, поцелуях или совместном приеме пищи и напитков с инфицированным лицом. Вирус вызывает хронический гепатит примерно у 80% инфицированных. Проведено множество исследований у лиц с подозрениями на гепатит. Антигены вируса гепатита С были обнаружены в цереброспинальной жидкости у 8 из 13 пациентов с ВГС, сообщаются случаи, когда вирус гепатита С может переноситься в мозг.

Вирус гепатита С – это гепатотропный вирус, который является одной из основных причин заболевания печени и потенциальной причиной значительной заболеваемости и смертности во всем мире. Вирус вызывает острый гепатит, который в основном субклинический, но постепенно развивается в хронический гепатит примерно у 80% инфицированных. Люди, инфицированные ВГС, подвержены риску развития хронического заболевания печени, цирроза и первичной гепатоцеллюлярной карциномы.

Рекомендуется скрининг всех лиц с факторами риска инфицирования ВГС на антитела к ВГС (против ВГС) или в определенных ситуациях с помощью полимеразной цепной реакции. Выявить заболевание на ранних стадиях можно при своевременном обследовании и диагностике методом ПЦР на гепатит С.

Что представляет ПЦР на гепатит

Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) выполняется для обнаружения возбудителя. Диагностические тесты на гепатит С можно разделить на следующие общие категории: серологические анализы, которые обнаруживают антитела к вирусу гепатита С; молекулярные анализы, которые обнаруживают и количественно определяют или характеризуют геномы вируса у инфицированного пациента.

Серологические анализы были разделены на скрининговые тесты на анти-ВГС (иммуноферментный анализ) и дополнительные тесты, такие как анализ рекомбинантным иммуноблотингом. Были разработаны три поколения тестов ПЦР, и каждое из них привело к улучшению чувствительности обнаружения ВГС.

Чаще всего проводится анализ крови на наличие антител к ВГС. Обнаружение даже низких уровней антител указывает на то, что пациент является носителем вируса гепатита, так как у здоровых неинфицированных людей этот показатель равен нулю.

Как проводится процедура

Процедура проводится путем забора венозной крови в лаборатории. Подготовка к анализу не сложная. Кровь берется натощак с соблюдением условий стерильности, так как бывают случаи, когда вирус заносят при несоблюдении санитарных условий или при повторном использовании перчаток.

Далее анализы направляются на тестирование и через 1-2 суток готовы результаты анализа. В некоторых случаях берут дополнительный образец крови, через несколько дней, чтобы точно подтвердить наличие или отсутствие РНК вируса.

Молекулярные вирусологические методы играют ключевую роль в диагностике и мониторинге лечения ВГС. Поскольку выращивание вируса в клетке требует специфических условий, молекулярные методы помогают выявлять вирус, сделав его одним из первых патогенов, идентифицируемых чисто молекулярными методами.

Метод амплификационной технологии нуклеиновых кислот (NAT) – международный стандартный метод считается «золотым стандартом» для обнаружения активной репликации ВГС. Он чрезвычайно эффективен для установления диагноза острой инфекции, поскольку РНК обнаруживается уже через 1 неделю после возможного инфицирования, и по меньшей мере, за 4-6 недель до сероконверсии. Диагноз инфекции устанавливается с помощью скрининга антител, за которым следует NAT для РНК ВГС для подтверждения, а также для наблюдения за пациентами во время лечения. Оценка вирусной нагрузки на исходном уровне также имеет решающее значение для определения ответа вируса во время терапии.

Когда необходимо пройти тестирование на гепатит С методом ПЦР

ПЦР проводят при обнаружении антител к вирусу гепатита или подозрении на гепатит С. Иногда бывает и так, что человек уже является носителем гепатита или даже имеет активную форму этой болезни. Пациенты с хроническим гепатитом С, вероятно, будут иметь значительные изменения в своем физическом и психическом состоянии, чаще всего проявляющиеся как усталость и депрессия, а сам вирус гепатита С может влиять на мозговую функцию. Существует вероятность прямого инфицирования центральной нервной системы.

Есть несколько вариантов, как передается вирус, поэтому необходимо их знать. Если у пациента в жизни были подобные ситуации, стоит проверится на ВГС методом ПЦР.

Вирус передается от одного человека другому, главным образом парентеральным путем. Основными путями передачи являются:

• потребление инъекционных наркотиков, использование нестерильных шприцев;
• переливание крови и инъекции;
• клинико-диагностические процедуры (профессиональные воздействия, такие как операции, зондирование, некоторые виды обследований);
• татуаж;
• распространение инфекции половым путем.

Передача профессиональным, перинатальным и половым путем менее активна по сравнению с передачей через кровь. Следовательно, эти способы не считаются основными источниками новой инфекции ВГС, независимо от населения или географического района.

Скрининг инфекции имеет несколько потенциальных преимуществ. При раннем выявлении инфекции антивирусное лечение может быть предложено в ходе заболевания, которое более эффективно на ранней, чем на поздней стадии.

Кроме того, скорейшее выявление вместе с рекомендациями и модификациями образа жизни может снизить риск передачи инфекции другим людям. Оптимальным подходом к скринингу является проверка лиц, имеющих факторы риска. Самым частым случаем, когда передается вирус, является переливание крови.

Риск инфицирования реципиентов при переливании крови слишком высок. До начала 21 века переливание крови приводило к высокому риску заражения, приблизительно 15-20%. В 20 веке 90% случаев посттрансфузионного гепатита были вызваны теми же вирусами.

Переход на взятие крови у добровольцев вместо платных доноров значительно снизил риск развития посттрансфузионного гепатита (до 10%). Скрининг крови дополнительно уменьшал возможность посттрансфузионного гепатита С, примерно в 10 000 раз – к нынешней ставке 1 на миллион переливаний. Несколько случаев, которые все еще происходят, связаны с тем, что недавно инфицированные люди сдавали кровь прежде, чем они вырабатывали антитела (период окна) к вирусу, что может занять до 6-8 недель.

Эффективность процедуры

Обнаружение вируса у пациентов с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) свидетельствует о наличии активной инфекции и потенциально полезно для подтверждения диагноза и мониторинга антивирусного ответа на терапию.

Оптимальные анализы ПЦР в настоящее время имеют чувствительность менее 100 копий РНК ВГС на миллилитр плазмы или сыворотки. Стандартизация и проверка качества диагностических лабораторий, выполняющих ПЦР ВГС, остается важной проблемой для будущего исследования.

Существуют две основные технологии для оценки уровней РНК ВГС или вирусной нагрузки. Количественная ПЦР является наиболее чувствительным критерием для определения вирусной нагрузки на гепатит С, тогда как тест ДНК с разветвленной цепью представляется наиболее точным методом.

Основными ограничениями текущих тестов являются неадекватный динамический диапазон, высокая вариабельность анализов на основе ПЦР и низкая чувствительность теста ДНК с разветвленной цепью. Молекулярные тесты также разработаны для классификации ВГС на отдельные генотипы.

Проблема профессионального донорства крови и небезопасных методов инъекций является потенциальным источником заражения гепатитом С во всем мире. Все практикующие врачи должны понимать, как установить или исключить диагноз инфекции ВГС и правильно интерпретировать тесты.

В отсутствие профилактической или терапевтической вакцины, а также постконтактной профилактики против вируса, необходимо диагностировать инфекцию ВГС, чтобы предотвратить заражение и последующие осложнения, включая первичную гепатоцеллюлярную карциному.

Тем не менее очень многое зависит от самого пациента. Если человек замечает у себя хотя бы некоторые подозрения на инфицирование или ощущает определенные симптомы (хроническая усталость, сонливость, потеря сил) – необходимо обратиться к лечащему врачу за направлением на анализ ПЦР на гепатит С.

1. Малыш П. Н. с соавторами. Полимеразная цепная реакция в диагностике гемотрансмиссивных инфекций – Украинский журнал клинической и лабораторной медицины, т. 4, № 284, 2009, с. 121 – 123.

Больше свежей и актуальной информации о здоровье на нашем канале в Telegram. Подписывайтесь: https://t.me/foodandhealthru

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог .

Общий стаж: 35 лет .

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист .

ПЦР диагностика гепатита – А, В, С.

ПЦР диагностика гепатита – А, В, С, качественный, количественный и генотипирование

С проблемой поражения печени вирусной природы может столкнуться доктор любой специальности. Вирусные гепатиты сегодня – это очень важная проблема для здравоохранения всего мира. Их диагностика проводится с учетом клинических проявлений, инструментально-аппаратных (УЗИ, фиброскан) методов, лабораторных данных анализов крови и мочи. Особое место занимают специфические иммунодиагностические методы.

Что такое ПЦР- диагностика гепатитов

• вирус гепатитов А, В, С;
• вирус герпеса;
• вирус Эпштейна-Барра;
• микробактерию туберкулеза;
• хеликобактер пилори;
• вирус иммунодефицита.

1. Качественное выявление ДНК/РНК – определение наличия или отсутствия возбудителя;
2. Количественное выявление ДНК/РНК (в реальном времени) – высчитывают количество микроба;
3. Генотипирование (секвенирование) – выявление генотипа, субгенотипов и определение нуклеотидной последовательности вирусного генома.

Виды гепатитов

Вирусные гепатиты – группа заболеваний, которая включает в себя самостоятельные (гепатит А, В, С) формы, имеющие свой механизм развития болезни, клинические и эпидемиологические особенности. Все эти инфекции объединены резко выраженными проявлениями поражения печени.

• чувство тяжести и боль в правом подреберье;
• увеличение печени;
• окрашивание слизистой, склер, кожи в желтый цвет (желтуха).

Гепатит В (генотип HBV) и С (генотип HCV) – это парентеральные вирусные инфекции. Передаются половым путем, при бытовых гемо (кровяных) контактах, медицинских и немедицинских (вне стен лечебного учреждения, очень часто – это салоны татуажа) инъекциях, от мамы к ребенку.

Симптомы гепатита В могут носить «стертый» характер, желтуха развивается постепенно в течение 3-6 недель, характерным признаком являются боли в суставах – затрагивается иммунная система. Заболевание опасно осложнениями: острая печеночная недостаточность.

Гепатит С называют «ласковым убийцей», по клинической картине он напоминает легкое проявление гепатита А. 80% больных не обращаются к врачу и переносят болезнь «на ногах», и инфекция приобретает хроническую форму и вирус-носительство. Хроническая форма опасна перерождением в цирроз печени и рак печеночных клеток.

Когда назначается анализ на ПЦР и как к нему подготовиться

• похудение, слабость;
• горечь во рту;
• кожный зуд;
• тяжесть и боль в эпигастрии.

• за две недели до анализа прекратить антибактериальную терапию – антибиотики могут влиять на достоверность исследования;
• ограничить жареную, жирную пищу, спиртные напитки;
• ужинать накануне не позже 20 часов;
• кровь сдавать утром с 8 до 10 часов, нежелательно даже пить воду, за 1 час до анализа не нужно курить.

Нормы и интерпретация результатов

• «обнаружено» означает, что в биоматериал выявлен фрагмент ДНК, характерного для вируса гепатита;
• «не обнаружено» – это нормальное значение в анализе здорового пациента.

• «ниже диапазона измерения» – это значит, что вирус присутствует в организме в мало количестве;
• «не обнаружено» – тест не обнаружил в пробах вирус;
• «выше диапазона измерения» – высокая вирусная нагрузка.

Генотипирование направлено на определение клинически значимых генотипов HCV (гепатита С). Результаты теста позволяют определить прогноз заболевания, предсказать длительность лечения.

Несмотря на успехи медицины, распространение болезней, связанных с поражением печени, остается очень высоким. В этой ситуации особое значение имеет современная лабораторная диагностика вирусных гепатитов, понимание патогенеза заболевания, форм течения болезни и стадий иммунного ответа.

Что значит ПЦР РНК анализ гепатита С?

Гепатит С – это вирусная инфекция, которая поражает печень. Проявления ее могут быть очень разнообразными – от нетяжелого заболевания, которое проходит без лечения через несколько недель, до серьезной, хронической болезни, которая без специальной терапии может приводить к развитию цирроза печени и гибели пациента. В то же время хронический гепатит С нередко длительное время протекает бессимптомно, и человек может даже не подозревать о наличии у него данного заболевания.

Чтобы выявить максимальное число людей, зараженных вирусом, в нашей стране проводится скрининговое обследование разных групп населения на гепатит С. Это исследование крови на антитела, его также называют исследование – anti-HCV. Скрининговое обследование – это диагностическая процедура, которая позволяет с высокой степенью вероятности исключить болезнь среди людей, у которых нет явных симптомов. Иными словами, это лабораторный или инструментальный метод, который позволяет быстро, эффективно и недорого обследовать большое количество людей, которые не имеют жалоб, для того чтобы на ранних стадиях выявить заболевание, и излечить его в более короткие сроки и с лучшими результатами. Подобным примером является флюорографический скрининг взрослых для выявления заболеваний легких (в первую очередь, туберкулеза).

Однако подобные скрининговые методы, как правило, не являются окончательными в постановке диагноза, и требуют дальнейшего дообследования. В случае с гепатитом С таким уточняющим анализом является определение РНК вируса гепатита С в крови, который позволяет выявить непосредственно сам вирус, вернее, его генетический материал.

Как мы уже неоднократно упоминали в нашем блоге, просто наличие антител не является основанием для установления диагноза в случае с большинством инфекций. Дело в том, что антитела образуются как защитная реакция организма на проникновение чужеродного агента, и могут сохраняться очень длительное время даже после выздоровления. Таким образом, человек, у которого при скрининговом обследовании обнаружены антитела к гепатиту С, может и не иметь вируса в крови, а значит и самого заболевания. Такое возможно, если заболевание было перенесено в острой форме и иммунитет смог без помощи лекарств самостоятельно избавиться от вируса. Самовыздоровление от вирусного гепатита С, к сожалению, происходит достаточно редко – около 15-20% от всех случаев заражения вирусом. Также положительный анализ на anti-HCV антитела обычно длительно сохраняется у людей, излечившихся от гепатита после получения курса противовирусных препаратов. Для того, чтобы уточнить, присутствует ли до сих пор вирус в организме пациента врач и назначает анализ – ПЦР РНК вируса гепатита С. Выявление в крови РНК вируса гепатита С будет говорить о наличии активно протекающего заболевания, которое требует начала специфической терапии.

Кровь на РНК можно исследовать качественным методом и количественным. В соответствии с названием, качественный метод отвечает только лишь на вопрос, присутствует ли вирус в организме; при исследовании же количественным методом мы получаем информацию, сколько именно единиц вируса содержится в 1 мл крови, то есть можем судить о том, насколько активно размножается вирус.

Дополнительно к анализу на РНК ВГС перед лечением также рекомендуется определение генотипа вируса. Вирус гепатита С имеет 6 генотипов и большое число подтипов. В нашей стране наиболее распространены первые генотипы 1, 2 и 3. Основная информация, которую дает врачу результат данного анализа, – к каким препаратам вирус чувствителен, то есть определяет выбор правильной схемы лечения. Конечно, в наше время существуют уже и так называемые «пангенотипические» схемы, которые эффективны против всех генотипов вируса. Однако в случае, если генотип вируса известен, количество схем, из которых можно выбирать наиболее подходящую каждому конкретному пациенту (с учетом сопутствующих заболеваний и других лекарственных препаратов, которые тот принимает), существенно расширяется. Также данный результат дает дополнительную информацию при дальнейшем наблюдении за пациентом. В случае, если после проведенного курса терапии вновь выявляется вирус, можно с большей вероятностью выяснить, является ли это неудачей лечения или повторным заражением. Именно поэтому в современных рекомендациях по лечению гепатита С – как в Европе, так и в Америке рекомендуется проводить генотипирование до начала терапии.

Помимо обследования до начала терапии, анализ на ПЦР РНК ВГС необходим для суждения об исходах лечения. Как уже упоминалось, анализ на anti HCV (антитела к вирусу гепатита С) в этом случае, наиболее вероятно, будет сохраняться положительным, и значит, не несет никакой ценной информации для врача. Критерием же полного излечения является отсутствие вируса в крови через 12 недель после проведенного курса терапии.

Хотелось бы отметить, что, если у вас в крови обнаружены антитела к гепатиту С, даже в случае абсолютно нормального самочувствия, необходимо обратиться к врачу для дообследования. Вялотекущее воспаление в печени рано или поздно приводит к перестройке ее ткани, ухудшению функции и, в конце концов, к развитию цирроза. Существующие же в наше время схемы терапии гепатита С позволяют в достаточно короткие сроки (обычно за 3 месяца), с минимальной вероятностью побочных эффектов и высокой эффективностью избавиться от вируса. Именно поэтому лечение хронического гепатита С в настоящее время рекомендуется всем пациентам с достоверно установленным диагнозом.

Автор: врач-инфекционист Университетской клиники H-Clinic Дегтярёва Светлана Юрьевна.

Медицинский редактор: руководитель Университетской клиники, к.м.н., врач-инфекционист Коннов Данила Сергеевич.